宿主细胞残留蛋白（Host Cell Protein，HCP）是指宿主细胞生产或者编码产生的非目标蛋白聚合。作为工艺过程相关杂质，其残留含量通常被认为是产品的关键质量属性（CQA），其残留量使处在较低水平上，也可能引发机体未知的免疫应答而影响生物制品的功效。

各国药典及药品监督管理局对于HCP控制均有相应要求和指导：美国药典USP1132章节中规定应用一种灵敏度较高的方法检测HCP，HCP的残留量应该控制在100ppm以下；2020年版中国药典三部各论中指出，CHO细胞残留蛋白占总蛋白含量要保持在0.05%以下。基于酶联免疫吸附 (ELISA)方法操作简便快速、高灵敏、高通量等特点各国药典法规推荐使用ELISA方法检测HCP。

虽然ELISA方法是各国药典推荐的生物制品HCP检测的首选方法，但由于ELISA方法的局限性以及HCPs复合组分等特点，采用ELISA方法检测HCP也存在诸多问题和挑战：

1、ELISA是总含量检测方法，故而无法鉴别和分析HCPs的种类及丰度，尤其是无法对单个高风险蛋白进行鉴别和定量分析。如需要对HCPs进行种类鉴定分析则需要结合质谱等方法充分研究。

2、HCPs是复合组分，而非单一蛋白，并非每个HCP蛋白都能产业有效的检测抗体。故而采用ELISA多抗的检测方法会存在漏检的风险。需要评估检测方法抗体对于样本中HCP种类的覆盖率。一定程度上覆盖率越高，能被抗体识别的HCPs种类越多，漏检的风险和影响就越小。

3、相比普通HCP，一些具有较强酶活性或免疫原性等特征的高风险蛋白（如PLBL2）越来越收到监管机构和行业的关注，对于此类HCPs如果漏检而无法监控其工艺去除情况和残留限度，则可能存在较大的药品安全风险。故而需要评估检测方法抗体对于高风险蛋白的识别和检出能力。

表1. 文献报道的CHO宿主细胞常见高风险HCP举例

4、ELISA检测方法是相对定量方法，需要通过参考品的标曲进行计算。而参考品中HCPs的组成和丰度与实际工艺样本中的HCP的组成和丰度的差异会影响检测结果，目前也没有HCP标准品统一尺度。为减少此类差异建议企业参考药典指南建议，如USP<1132>，在临床III期及BLA阶段，需要考虑细胞类型及工艺特异性等因素，开发平台专属试剂盒或产品/工艺专属试剂盒。

图1. USP <1132>章节关于不同阶段使用HCP试剂盒类型的建议

针对目前宿主细胞残留蛋白ELISA检测方法存在的问题，依科赛自主研发出支持申报的高覆盖HCP检测试剂盒，包含ResiQuant^®CHO宿主蛋白残留检测试剂盒、ResiQuant^®E.coli宿主蛋白残留检测试剂盒、ResiQuant^®293宿主蛋白残留检测试剂盒。抗体覆盖率均达到80%以上，尽可能减少漏检风险，且试剂盒均经过设计优化，满足多种复杂基质情况的检测需求，并通过系统性方法学性能验证。

也恭喜我们的客户浙江博锐生物和北京益科思特生物采用ResiQuant^®CHO宿主蛋白残留检测试剂盒进行放行检测的项目成功获得IND批件。

1、灵敏度高：CHO HCP检测试剂盒定量下限可达1ng/mL；

2、定量范围广：293 HCP检测试剂盒定量范围10~1000ng/mL；

3、抗体覆盖率高：抗体覆盖率均可达80%以上；

图2.ResiQuant® HEK293 HCP检测试剂盒抗体

覆盖率验证数据（覆盖率88%）

4、能识别高风险蛋白：对于已有文献报道的高风险蛋白均能大部分识别检测；

表2. ResiQuant® CHO HCP检测试剂盒

可覆盖检测的高风险蛋白（仅部分展示）

5、制备工艺具有代表性：选用具有代表性的细胞株或菌株，模拟相关生物制品实际表达工艺（如质粒生产的碱裂工艺）制备校准品和抗原；检测方法特异性更高；

6、供应链安全：批间批内稳定性高，供货稳定充足避免抗体频繁换批。

依科赛生物拥有专业的技术团队和丰富的试剂盒开发经验，可以提供针对特定宿主细胞与生产工艺的定制化HCP检测试剂盒开发服务：从抗原选择分析及制备，标准品赋值溯源到全分子HCP免疫制备高覆盖率抗体及体系优化，定制开发产品/工艺专属HCP检测试剂盒或平台型HCP检测试剂盒，满足法规对于不同阶段HCP检测的要求。同时也可以提供基于AAE-MS等技术平台的抗体覆盖率验证服务。